| 1 基因打靶技术的发展简史及其应用前景 1.1 基因打靶技术的概念 1.2 胚胎干细胞技术的发展 1.3 同源重组技术的发展 1.4 基因打靶技术在生物医学研究中的应用前景 2 基因打靶的策略及载体设计 2.1 完全基因剔除 2.2 基于CRE-LOXP重组酶系统的条件基因打靶技术 2.3 用基因打靶技术引入精细突变 2.4 大片段染色体的重排和删除 2.5 随机基因剔除-基因诱捕 2.6 ENU诱导点突变与大规模基因突变和功能研究 2.7 利用基因敲入技术制备转基因动物 3 中靶胚胎干细胞的筛选 3.1 胚胎干细胞的分离和培养 3.2 打靶载体转染ES细胞 3.3 ES细胞的体外诱导分化研究 4 由中靶细胞突得突变体动物的方法 4.1 通过囊胚显微注射法获得嵌合体小鼠 4.2 通过胚胎聚合法获得完全ES细胞来源的胚胎或嵌合体小鼠 5 基因打靶在现代生物学研究中的应用实例 5.1 应用基因剔除技术研究SMADS基因的功能 5.2 葡萄糖激酶基因剔除及成年型糖尿病模型 5.3 人类疾病的基因打靶小鼠模型 5.4 核移植法研制突变体动物 6 基因打靶技术存在的问题及对策 6.1 打靶载体设计引起的问题 6.2 表型解释中存在的问题 6.3 关于解决基因打靶研究中粗乃的问题的建议 6.4 总结 7 附录1 常用实验方法 7.1 靶基因CDNA探针的克隆 7.2 靶基因基因组DNA片段的筛选和克隆 7.3 NORTHERN杂交分析 7.4 小鼠的基因型分析 7.5 常规组织学分析 7.6 免疫组化分析 7.7 普通原位杂交 7.8 整体原位杂交 7.9 小鼠的全骨架制备 7.1 利.. |
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