| 实验计划表 导论 1 基因文库的构建 1—1 染色体dna的提取 1—2 总rna和mrna的提取 1—3 噬菌体dna的提取 1—4 染色体dna的部分消化 1—5 基因组文库的构建 1—6 cdna合成 1—7 cdna文库的构建 2 目的基因的获得 2—1 pcr扩增及rt—pcr 2—2 核酸电泳 2—3 核酸探针的标记及检测 2—4 核酸探针筛选基因文库 3 载体质粒的制备 3—1 质粒dna的提取与纯化 3—2 核酸纯度、浓度与相对分子质量的测定 4 扩增质粒的构建 4—1 限制性内切酶的酶切反应 . 4—2 凝胶电泳法进行dna的分离、提纯 4—3 dna片段的体外连接 5 重组dna导入宿主细胞 5—1 感受态细胞的制备 5—2 重组质粒的转化 6 重组子的筛选与鉴定 6—1 阳性克隆的筛选 6—2 测序与序列同源性分析 6—3 southern印迹 7 表达质粒的构建与诱导表达 7—1 表达质粒的构建 7—2 northern印迹 7—3 外源基因的诱导表达 7—4 sds—page 7—5 western印迹 7—6 酶联免疫吸附测定(e1isa) 7—7 蛋白质生物功能测定法 8 工程菌的培养与目标产物分离 8—1 发酵条件的优化 8—2 诱导表达蛋白质的分离沉淀 8—3 凝胶过滤层析 8—4 离子交换层析 8—5 蛋白质浓度的测定 8—6 酶活性的测定 8—7 分离纯化蛋白的收率计算与保存 参考文献 附录1 简写 附录2 实验注意事项 附录3 如何撰写实验报告 附录4 常用的碱基、氨基酸符号及缓冲液 附录5 大肠杆菌基因型 附录6 培养基与试剂的配制 附录7 实验仪器 |
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