| 姓名：汪天虹著 作者简介： 作品：《分子生物学实验》 |
| 第1章 分子生物学实验原理与技术概述 分子生物学研究是在分子水平上对基因及其活性，包括基因的转录、翻译、dna修复、重组和转位所开展的一系列研究。分子生物学基本技术指重组dna技术（recombinant dna techniques），也称为基因工程（genetic engineering）技术、基因操作和遗传工程。它是现代生物技术的核心。基因工程的本质是按照人们的设计蓝图，将生物体控制性状的基因进行优化重组，并使其稳定地遗传表达。这一技术在超越生物王国种属界限的同时，简化了生物物种的进化程序，大大加快了生物物种的进化速度。自20世纪70年代以来，快速发展的基因工程技术直接提供了在基因水平上改造生物性状、生产目的蛋白的方法。重组dna技术的兴起与发展，利用基因工程技术构建具有各种新遗传性状的基因工程重组生物体，不仅推动了基础研究的发展，使生物学进入了分子生物学的全新阶段，而且也促进了各项应用研究的进展，对现代生物技术的发展起到了巨大的推动作用。 基因工程研究史上的第一次重大突破，是把人工合成的生长激素释放抑制素基因转入有乳糖启动子控制的escherichia coli（e.coli）中表达。这也是第一个在原核细胞中表达的真核基因。由重组e.coli所产生的嵌合型生长激素释放抑制素多肽在体外用溴化氢处理，便可产生活性蛋白质。通过这种方式，只需要成本为几美元的9l培养液，就可从中得到50 mg的生物活性物质。若从羊脑中提取相同数量的生物活性物质，则需要50万头羊的脑，由此可见基因工程改造的微生物在生物制药中的辉煌前景。 近年来，随着基因工程技术的快速发展，已经利用具有高生产能办的e.coli或酵母细胞构建基因工程菌，大量表达有价值的药用蛋白质。继生长激素释放抑制素生产成功之后，陆续又有人胰岛素、生长激素、a-干扰素、促红细胞生长素、乙型肝炎疫苗、b-干扰素、y-干扰素和白细胞介素等由基因工程微生物生产的多种基因工程药物投放市场。 …… 更多 |
| 第1章 分子生物学实验原理与技术概述 第2章 染色体dna和rna的制备 实验2.1 细菌染色体dna的提取 实验2.2 酵母染色体dna的提取 实验2.3 sds裂解法提取丝状真菌染色体dna 实验2.4 rna的提取 实验2、5 凝胶电泳进行dna分离纯化 实验2.6 核酸纯度、浓度与相对分子质量的测定 第3章 载体的制备 实验3.1 质粒dna的提取——碱变性提取法 实验3.2 λ噬菌体dna的提取 实验3.3 λdna去磷酸化臂的制备 第4章 重组质粒的构建 实验4.1 限制性核酸内切酶的酶切反应 实验4.2 酶切dna片段的cip处理 实验4.3 酶切dna片段的分离与回收 实验4.4 载体与外源dna的连接反应 第5章 重组dna导入受体细胞 实验5.1 感受态细胞的制备及质粒转化 实验5.2 λ噬菌体载体与外源dna片段的连接、体外包装与扩增（基因组文库的构建） 第6章 重组子的鉴定和外源基因的表达 实验6.1 e.coli转化子的筛选与验证 实验6.2 southern印迹杂交 实验6.3 northern印迹杂交 实验6.4 斑点印迹杂交 实验6.5 外源基因的诱导表达 实验6.6 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测重组蛋白的表达 实验6.7 western印迹技术检测重组蛋白的表达 第7章 在酿酒酵母中克隆表达外源基因 实验7.1 酵母染色体dna的提取 实验7.2 木糖还原酶基因的获得 实验7.3 重组质粒的构建（酶切连接） 实验7.4 酵母质粒的小量提取与插人方向验证 实验7.5酵母菌liac完整转化酵母细胞 实验7.6酿酒酵母转化子的验证 实验7.7重组酵母木糖还原酶活性的测定 实验7.8重组酵母菌株发酵实验及发酵产物分析 第8章 丝状真菌的转化与转化子的筛选 实验8.1 瑞氏木霉原生质体的制备与转化实验 实验8.2 更多 |
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