| 姓名：王廷华著 作者简介： 作品：《PCR理论与技术》《蛋白质理论与技术》《组织细胞化学理论与技术》《基因克隆理论与技术》《分子杂交理论与技术》《基因克隆理论技术》 姓名：王廷华 Pierre Dubus著 作者简介： 作品：《PCR理论与技术》 |
| 上篇 pcr的基本理论与技术 第一章 聚合酶链式反应 分子克隆（molecular cloning）、dna测序（dna sequencing）和聚合酶链式反应（polymer-ase chain reaction，pcr）是分子生物学的三大主流技术。在这三种技术中，pcr技术在实践中的应用日益广泛，并随着分子生物学实验技术的成熟而不断创新和拓展。早在20世纪70年代初期，h.ghobind khorana和他的同事就提出了用pcr技术来减少基因化学合成中的工作量的想法。由于当时技术条件的限制，基因测序、引物合成等方面的研究都存在一定的局限性，特别是还没有发现稳定的耐热dna聚合酶（thermostable dna polymerase）等诸多因素，使得khorana的想法在当时看来还不可能实现，并且很快就被人们所遗忘。然而，随着耐热dna聚合酶的发现，15年后，美国pe.cetus公司的kary mullis和他的同事通过使用e coli dna聚合酶i的klenow片段成功地在体外扩增了哺乳动物的基因，从而实现了khorana的设想，并将这一技术命名为聚合酶链式反应（pcr）。随着耐热菌termus aquaticus中耐热dna聚合酶的发现和应用，大大地提高了pcr的效率并推动了其向pcr自动化技术的发展。此后，利用pcr技术，人们能在数小时内通过试管中的反应将特定的dna片段扩增数百万倍。pcr技术成为生物科学研究的一种重要方法，为医学、遗传学和考古学等学科的研究提供了新的技术手段。目前，与pcr相关的技术已经不断地被开发应用。 第一节 pcr技术的原理 聚合酶链式反应（pcr）是一种选择性体外扩增dna或rna片段的方法，即通过试管中进行的dna复制反应，使极少量的基因组dna或rna样品中的特定基因片段在短短几小时内扩增上百万倍。其反应原理与细胞内的dna复制相似，但pcr的反应体系要简单得多，主要包括dna靶序列、与dna靶序列单链3’末端互补的合成引物、4种dntp、耐热dna聚合酶及合适的缓冲液体系。 …… 更多 |
| 上篇 pcr的基本理论与技术 第一章 聚合酶链式反应 第一节 pcr技术的原理 第二节 pcr反应体系 第三节 pcr的反应温度和循环参数 第四节 pcr反应条件的优化 第五节 pcr产物的检测 第六节 pcr产物的纯化 第二章 dna模板的制备及pcr技术中常见问题的处理 第一节 dna模板的制备 第二节 pcr常见问题及处理 第三节 pcr技术中污染问题 第四节 pcr技术实验室的质量控制 第三章 原位pcr相关技术 第一节 原位pcr 第二节 原位pcr的分类 第三节 原位pcr技术 第四章 定量pcr技术 第一节 概述 第二节 基本概念 第三节 定量pcr技术基本原理 第四节 定量pcr技术的种类 第五节 定量pcr的主要影响因素 第六节 常用的定量pcr技术及其在临床上的应用 第七节 pcr产物的检测与定量技术 第八节 目前存在的问题及展望 第五章 其他相关pcr技术 第一节 反转录-聚合酶链反应 第二节 套式pcr 第三节 多重pcr 第四节 pcr结合等位基因特异性的寡核苷酸探针法 第五节 pcr结合序列特异性引物技术 第六节 单链构型多态性分析 第七节 限制性酶切片段长度多态性分析 第八节 mvr-pcr 第九节 rapd技术 下篇 pcr相关技术的应用 第六章 pcr技术用于构建cdna文库、测序及基因突变的检测 第一节 cdna文库构建的基本技术 第二节 pcr测序 第三节 pcr技术用于基因突变的检测 第七章 pcr技术分析dna序列多态性 第一节 dna的两种多态性和遗传标记分类 第二节 pcr技术分析dna序列多态性 第八章 用pcr技术分析vntr和str 第一节 概述 第二节&nbs 更多 |
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